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    微生物檢測中菌懸液不會制備,化驗結果怎么能保證準確?

    食品微生物檢測
    錄入時間:2019-10-17 8:24:29 來源:食品微生物檢測公眾號

        對于微生物實驗室的小伙伴們來說,每天除了面對接樣,檢測樣品,配培養基等各種瓶瓶罐罐交響曲以外,制備合適濃度的菌懸液應該是每天的頭號大事了,畢竟有太多的項目需要合適濃度的菌懸液,產品方法適用性,培養基促生長測試,最要命的是每天產品檢測中的陽性對照菌菌懸液的制備。

        小編今天就給大家分享一篇文章。

        1.操作流程:

        這里以大家最常用的大腸埃希菌為例,其它菌種方法類似。

        ①菌種制備:  

        從菌種保藏管中吸取少量菌液,轉接到新鮮的TSB中,于30℃-35℃培養箱中培養18-24小時。

        ②稀釋:  

        取步驟1的培養物1ml,加入到9ml的pH7.0 氯化鈉蛋白質緩沖液中,進行倍比稀釋。


        ③平板計數:

        取稀釋好的菌液,一般取3個稀釋級,每個梯度取2ml,分別加入兩塊90cm的平皿中,每皿加入1ml菌液,傾注45℃左右的已經經過確定的TSA培養基,輕輕搖勻,靜置,培養基凝固后,置30-35℃培養箱中倒置培養48小時。

        ④菌落計數:

        將培養后的平板,置于菌落計數器下進行菌落計數,以確定哪個稀釋級的濃度能夠滿足測試的要求。

        2.注意事項:

        菌種制備:

        也可以使用TSA平板進行培養,如果轉接的是冷凍保藏管中的菌,最好再轉接一次,使用第二次轉接的菌種。

        稀釋:

        取菌液的時候,需要先對菌液進行振蕩或吹打混勻,方可吸取菌液。可以不用進行倍比稀釋,只要能保證最后加入到測試樣品中的菌的數量符合要求即可。

        平板計數:

        取菌液時同樣需要先將試管中的菌液進行混勻。

        培養基菌落計數:

        不建議逐日觀察結果,因為平板中可能有凝集水, 逐日觀察拿動平板,可能會導致水落到菌落上,菌跟著水流到下一個空白地方,導致結果不準確;另外如果是霉菌,因為有孢子,拿動也會導致孢子落到平板空白地方,影響結果。

        3.事后思考:

        ①菌液的使用:

        菌懸液使用有時效性要求

        2015版<中國藥典>和<歐洲藥典>8.0版要求如果放置在室溫,菌懸液必須在2小時內使用,如果放置在2-8℃保存,可以在24小時內使用。

        那么問題來了,菌懸液的菌的數量需要在48小時后才能確定,但是在24小時之內菌懸液必須使用,所以在不知道菌含量的情況下,樣品測試需要做至少三個梯度。

        筆者之前在微生物實驗室做了5次的菌懸液制備,為了保證實驗的成功,每次都是要做三個梯度,雖然大多數都是同一個稀釋級的含量符合要求,但是還是偶爾有另一個稀釋級才符合要求的時候,所以筆者每次都乖乖的做三個梯度的測試,還好筆者那個時候依據的法規中,日常的無菌檢查和控制菌檢查中沒有陽性對照的要求。

        這里說的三個梯度不是說只是計數,而是菌懸液實際運用的測試中也需要三個梯度,舉個例子,某個無菌產品無菌檢查中的陽性對照測試,需要做三個對照。當然,同樣的產品方法適用性,培養基促生長測試也是如此。流程圖如下:



     

        ②步驟的繁瑣:

        這個流程圖中,還是省略了一些步驟,一句話帶過的倍比稀釋,做過的小伙伴們知道,這個說起來容易做起來難。

        另外在接收菌種和從冷凍保藏管中取出菌種來使用時,還需要進行相應的鑒定,所以不要覺得這個流程好冗長,其實已經是簡單版的。

     

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